业界动态
柱式法膜蛋白提取新应用——材料包裹
2024-10-31 19:58

近年来,将细胞膜完整嫁接到纳米颗粒表面的涂层技术将纳米医药推向新的发展阶段,包裹伪装后的纳米颗粒能更好地适应复杂的生理环境,通过同源识别不仅可逃避免疫系统的清除,还大大增强了其靶向作用特性。

柱式法膜蛋白提取新应用——材料包裹

纳米技术在恶性肿瘤、感染性疾病、糖尿病等多种复杂疾病的诊断与治疗方面取得了重大发展,理想的医用纳米材料应该具有良好的生物相容性、靶向特异性、低毒副作用等优点。在最近的纳米医疗研究中,表面修饰纳米材料一直是开发新型药物运载工具的关注热点。

表面修饰使纳米材料具备持续释放药物、高载药率、表面可功能性修饰等优点。早先通常使用聚乙二醇(polyethylene glycol, PEG)修饰纳米材料表面,用于延长循环时间以及逃避机体清除,但在后续的临床应用中发现PEG涂层的载药纳米颗粒在某些疾病中会引发免疫反应,反而增加了纳米颗粒被机体免疫系统清除的风险。细胞膜作为生物体内环境交流的窗口和界面,一直被不断模拟并用于纳米颗粒的包裹与伪装,借以改善纳米颗粒的生物学特征。

Yao Liu, et al. Nano-Micro Letters.2019

细胞膜修饰能够赋予纳米材料良好的生物界面性质,包括良好的生物相容性和多种生物功能:

(1)细胞膜的选择透过性可使货物截留在细胞膜囊泡内,因而细胞膜包覆纳米材料可以作为药物载体或者纳米粒子合成的模板;同时细胞膜的选择透过性可允许特定物质(如过氧化氢)通过细胞膜,和封装在细胞膜囊泡内的生物酶或纳米酶进行反应,作为酶促纳米反应器;

(2)细胞膜的信号交流功能赋予纳米材料特定功能

a. 延长其血液循环寿命,提高材料生物相容性;

b. 诱导有害生物分子吸附到细胞膜上,从而中和毒素;

c. 靶向识别病灶(肿瘤或炎症),提高药物利用度,减少药物毒副作用;

d. 可提高抗原呈递细胞(APC)的抗原递呈效率,促进APC成熟,从而引发瀑布式的免疫反应,发挥强效作用而杀伤大量肿瘤细胞 。

 

目前有多种细胞膜或融合细胞膜可用于纳米颗粒包裹伪装,包括红细胞膜、血小板膜、炎症细胞膜、免疫细胞膜、肿瘤细胞膜、白细胞膜、干细胞膜等。

不同来源细胞膜特性及其包裹纳米颗粒的应用

细胞膜来源

细胞膜特性

应用

红细胞膜

逃避免疫监视及长循环;生物降解性和生物相容性,相对靶向特性

靶向输运药物,纳米海绵解毒,制备抗菌疫苗,治疗自身免疫性疾病,结合光热治疗或光动力治疗,包裹磁性纳米颗粒用于肿瘤成像

炎症细胞膜

穿越内皮和趋化作用,靶向于感染和炎症部位,靶向于循环肿瘤细胞

抗炎、抗肿瘤

免疫细胞膜

通过同源识别逃避免疫攻击,靶向作用于肿瘤细胞,吸引特异性病原体

靶向抗实体瘤及转移性肿瘤,肿瘤成像,光热疗法抗肿瘤,抗HIV

肿瘤细胞膜

通过同源识别靶向作用于肿瘤细胞,靶向于免疫细胞激发肿瘤免疫

肿瘤成像与光热治疗,靶向输氧治疗低氧诱导性化疗药物抵抗,抗肿瘤疫苗与靶向输送化疗药物

干细胞膜

肿瘤归巢能力

靶向输送抗肿瘤药物,光热疗法结合基因疗法抗肿瘤

内皮细胞膜

肿瘤及病原体靶点

治疗内皮相关炎症与肿瘤

通常制备细胞膜包裹纳米颗粒可分为三个关键步骤:

(1)选取合适的细胞并分离其细胞膜

(2)制备相应的纳米颗粒(需考虑拟负载药物或抗原等)

(3)分离出的细胞膜包裹纳米颗粒物,形成核壳结构

以上步骤对于制备细胞膜包裹纳米颗粒都很关键,在这里我们着重介绍如何获取细胞膜,分离细胞膜主要涉及细胞裂解、机械破坏和差速离心等处理,以清空胞内成份。

细胞膜制备方案

(1)蔗糖梯度密度离心方法——

通常采取高速打碎机破碎、低渗、玻璃珠与细胞共振荡、冻融法、超声波打碎等方法对细胞进行破碎,之后含有细胞膜的细胞裂解物通过一系列差速离心再加上梯度离心来分离细胞膜与细胞器。

传统的蔗糖梯度密度离心虽可以获取细胞膜,但同时该方法也存在一些局限性:

a.样品需求量巨大,得率较低

b.操作步骤繁琐,耗时较长

c.密度梯度剂配制复杂

d.离心力需达100,000G,需超速离心机

e.细胞膜存在其他组分污染

f.质膜囊泡大小不均一

(2)INVENT柱式法质膜和细胞组分分离技术(仅限科研使用)——

针对传统细胞膜获取方法的局限性,Invent质膜和细胞组分分离技术可以快速获取具有天然活性并且大小均一囊泡状质膜结构,完整保留质膜结构上的自身识别分子、糖脂、脂蛋白等,适用于多种细胞的细胞膜分离,如炎症细胞、肿瘤细胞、内皮细胞等。下图为使用INVENT柱式法质膜和细胞组分分离技术(Cat#SM-005)获取的质膜囊泡电镜图及动态散射检测。





图片来源:Ma, K., Qi, G., Wang, B., Yu, T., Zhang, Y., Li, H., ... & Jin, Y. (2021). Ultrasound-activated Au/ZnO-based Trojan nanogenerators for combined targeted electro-stimulation and enhanced catalytic therapy of tumor. Nano Energy, 106208.
 

Invent柱式法质膜和细胞组分分离技术
*仅需少量样品即可操作
*无需超高速离心
*无需自配溶液
*交叉污染少
*获得的囊泡大小均一,具有活性
*操作仅需1小时


具体分离方法如下:

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